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Single Molecule Inexpensive Fluorescence In Situ Hybridization

La technique de SmiFISH (Single Molecule Inexpensive Fluorescence In Situ Hybridization) permet d’étudier la transcription et la localisation de l’ARN en visualisant des ARNm individuels dans des cellules uniques.

Développement et Robotisation des Sondes

Nous avons développé la préparation et la robotisation des sondes afin de créer une banque spécifique. Les sondes spécifiques des gènes sont amplifiées à partir du pool d’oligonucléotides par PCR en utilisant des codes-barres propres à chaque gène.

Processus de Production des Sondes

Le processus se déroule en plusieurs étapes :

  1. Seconde PCR : Utilisation d’oligonucléotides contenant un promoteur T7, une séquence FLAP, suivie d’une purification du produit.
  2. Transcription in vitro : Le produit de PCR est transcrit in vitro pour générer les sondes d’ARN.
  3. Hybridation des sondes : Les sondes ainsi générées sont hybridées contre leur cible.
  4. Révélation des ARNm : Un oligonucléotide fluorescent s’hybride contre le FLAP, permettant de visualiser les ARNm.

Banque de Sondes Disponibles

Nous avons créé une banque de sondes dirigées contre 2 474 gènes humains.

Contactez-nous

Si vous souhaitez des informations complémentaires, merci de nous contacter.